湘产百合的SRAP分析与核心种质库的初步构建
【作者】 高昱
【导师姓名】易刚强
【学位名称】硕士
【学位年度】2015-01-01
【学位授予单位】暂无
【分类号】S682.29;|R282.5
【录入时间】2017-06-21
【摘要】百合集药用、食用、观赏于一身,具有广泛的开发前景。百合种质资源丰富,湖南为我国百合主要产区,百合产业已初具规模。为更好地保存和开发湘产百合种质资源,本研究运用SRAP分子标记技术,对按照50%抽样比例在87份湘产百合种质中所抽取45份种质的亲缘关系、遗传多样性进行分析,初步探究百合核心种质的构建方法,填补了百合在核心种质构建方面的研究空白,研究结果将对其他中药材资源的收集保护、研究及育种工作具有指导意义。主要研究结果如下：1.确定了适合SRAP分析的百合基因组DNA提取方法,即改良CTAB法。在传统CTAB提取方法基础上,根据百合鳞叶的特殊性进行改良和优化,增加β-巯基乙醇用量,且在使用前加入3%(V/V)的β-巯基乙醇,并降低水浴温度(64℃),减免了多酚氧化,5mol/L NaCl进一步去除多糖。2.结合正交设计和单因素试验对湘产百合SRAP体系进行优化,最佳反应体系(201μL)为：Mg2+浓度2.5mmol/L, dNTPs浓度0.20gmol/L,引物浓度0.20nmol/L, Taq酶1.0U,模板DNA50ng。3.从144对引物组合中筛选出27对产物稳定、多态性丰富的引物组合,并确定其最佳退火温度。对45份百合初级种质DNA共扩增出278个位点,多态位点218个,物种水平上多态性比率为78.42%,Nei’s基因多样度指数H0.3079,遗传多样性Ht0.3079, Shannon’s信息指数I0.4469,遗传距离变化范围为0.0109-0.7913。4.百合种质聚类分析结果表明：在相似性阈值为0.52的条件下,将供试样品划分为2大类,即种质来源于隆回、浏阳、平江等地所代表的百合为一大类,种质来源于龙山、耒阳、永顺等地所代表的卷丹为第二大类。聚类结果提示大部分供试样本与地理位置分布有一定关联性,并具有明显的海拔相关性,人工栽培品种与野生种之间的遗传背景存在一定的差异,但并未表现出较大的遗传距离。5.根据SRAP数据聚类结果,对45份百合初级种质采用7种方法构建核心种质,通过等位基因数、有效等位基因数、Nei’s遗传多样性指数和Shannon’s信息指数的对比,表明采用根据相似性阈值的分组取样策略获得的核心种质代表性较好。确立湘产百合种质资源的核心种质库(15个样本)编号：1、2、7、8、10、13、19、27、28、34、35、36、39、40、43,核心种质的有效等位基因数NE、Nei’s遗传多样性指数H和Shannon’s信息指数I保留率在98.2%以上,核心种质能很好的代表初始种质。
【外文摘要】暂无